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    要想實驗做得好,PCR儀的操作很重要
    更新時間:2019-09-05   點擊次數(shù):2279次
       要想實驗做得好,PCR儀的操作很重要
      PCR儀是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進而達到基因復制的目的??蓪崿F(xiàn)更好的引物退火溫度控制,該技術的一種形式便是設計帶有三個或更多分割金屬模塊,對于樣品溫度控制的能力對于PCR檢測結(jié)果的準確性和整體性能十分重要。儀器特異性的參數(shù)如升降溫速度,維持時間以及算法對于預測樣品溫度,包括模塊溫度都是準確控制樣品溫度的關鍵。它的升降溫速度意味著在一定時間內(nèi)發(fā)生的PCR步驟之間的溫度變化,并通過用攝氏度每秒(°C/sec)作為單位。 相應的“升溫”和“降溫”分別代表著熱模塊的加熱和冷卻過程。
      PCR儀的操作注意事項:
      盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應該注意:
      1.戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套;
      2.使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,PCR儀吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
      3.避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
      4.操作多份樣品時,制備反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應的度;
      5.后加入反應模板,加入后蓋緊反應管;
      6.操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性;
      7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染,使用可替換或高壓處理的加樣器。
      如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR儀操作過程中加樣器應該,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū);
      8.重復實驗,驗證結(jié)果,慎下結(jié)論。
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